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      细胞形态异常,鱼骨图来帮忙(一)

      各位做实验的时候都遇到过这种情况吗?

      当您开开心心地把养好的细胞拿出来

      准备做后续实验时

      突然发现

      “啊~~~,我的细胞又长跑偏了!!!”

      谁能体会实验猿的这种心塞

      那么这个时候我们就发挥出了作为一个实验猿的耐心和决心

      一定要搞清楚,到底是哪一步出现了问题

      导致细胞形态异常

      BI中国市场部为大家贴心的准备了一份礼物~


      (进入官网点击相应骨刺即可查看相关讯息噢~)

      接下来,大家跟紧小编的步伐,一起去探索的奥秘吧 !



      鱼骨图是一种分析问题产生的质量管理方法,此鱼骨图分析造成细胞形态发生异常时的几个主要原因:

      ◆ 外源污染(微生物污染)

      ◆ 内源异常(细胞层面)

      ◆ 人为操作/环境

      ◆ 培养基

      ◆ 辅助试剂

      ◆ 培养耗材

      鱼骨图可帮助研究人员厘清实验上的问题。鱼骨图鱼刺的大到小或近到远,相应表示问题发生概率的高低。

      接下来,我们将逐条分析这些污染原因,并为大家附上解决方案。(如下表格点击货号即可查看产品信息)

      外源污染


      外源污染主要指的是微生物污染,又可分为以下几点:

      ? 真菌,酵母菌? 细菌  ?支原体  ? 黑胶虫  ? 病毒 ? 细胞交叉污染


      以下几种微生物污染,通常是肉眼可见突发式造成细胞培养基浑浊和变色,在可见光显微镜下可以观察到真菌、酵母菌和细菌污染状况。



      ? 真菌,酵母菌

      真菌:这类微生物外观类似棉絮状的漂浮物,在显微镜下可观察到菌丝体,污染早期不会使培养基变黄。


      酵母菌:显微镜下常见成串的珠状物形态呈卵形,大约比细胞小5~10倍,当其进行出芽生殖时,会聚集成连体结构;爆发污染严重时,会造成培养基pH值改变,不易除去。

      解决方案:


      表1.产品列表


      产品名称-中文名称

      货号

      作用种类

      两性霉素B,250mg/ml

      03-028-1

      真菌,酵母菌和霉菌

      两性霉素B,2500mg/ml

      03-029-1

      制真霉素,10000units/ml

      03-030-1

      真菌,酵母菌和霉菌

      青链双抗(青霉素-链霉素)

      03-031-1

      对革兰氏阳性菌G+,革兰氏阴毒性G-

      青链双抗(青霉素-链霉素)10X浓缩

      03-031-5

      青链霉素,制真菌素三抗

      03-032-1

      真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-

      青链霉素,两性霉素B三抗

      03-033-1

      真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-

      青链霉素,新霉素三抗

      03-034-1

      真菌、酵母菌和霉菌、G+、G-

      硫酸庆大霉素溶液,50mg/ml

      03-035-1

      对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,支原体

      卡那霉素溶液,10mg/ml

      03-049-1

      对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌,支原体


      ? 细菌


      细菌污染时,培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊,细胞停止生长甚至死亡;有些状况下培养基颜色改变不明显但细胞形态会变异(出现多角,多核状况)、细胞不附着,显微镜观察背景有大量黑点。

      解决方案:(同上表格1)

      Dr.Cell可提供:



      ?支原体


      支原体种类较多,常以寄生或腐生营养方式生长,广泛存在于环境之中,是细胞培养过程常见污染,经常来源于实验人员(支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道)、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具,大小只有0.15~0.3μm,所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法,0.22μm过滤膜。支原体增长速度相较于细菌比较缓慢,污染初期(轻微)培养基可能依然清澈不会变黄,所以轻微污染时不容易用常规方法发现(细胞外观观察或是DNA染色法)确认。


      支原体污染不但会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应,它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌体实验结果偏差。

      解决方案:

      Biological Industies(BI)可提供:支原体检测/处理/预防全套解决方案


      表2.支原体相关产品列表

      中文名称

      货号

      备注

      支原体污染检测试剂盒

      20-700-20

      高敏感性PCR反应检测方式,明确及快捷的确认细胞培养中支原体污染

      支原体污染处理试剂

      03-036-1

      03-036和03-037需要联合使用
      03-038单独使用,这是两种不同的处理支原体污染的途径,效果也会有所不同

      03-037-1

      03-038-1

      支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂

      IC-110100

      培养箱和无菌操作台消毒试剂,可有效预防微生物的生长和污染。其成分是可生物降解,无毒无刺激

      支原体预防试剂

      01-867-1

      即用型的浓缩溶液,50ml Aquaguard-1溶液加至5L的无菌水中,每2-4周更换一次培养箱中水

      01-916-1

      添加在水浴锅中,高效抗菌性化学化合物,可有效杀灭革兰氏阳性菌和阴性菌


      Dr.Cell可提供:支原体污染检测


      ? 黑胶虫


      目前科学界对黑胶虫并无定论,认为是不明沉淀现象或多种未知生物污染现象的通称。

      在高倍率显微镜头下,可观察到各式形状的小黑点(卵圆状、球状、杆状等)、活跃的布朗运动及明显游动现象,部分黑胶虫具有细胞毒性,可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。

      解决方案:

      Dr.Cell可提供:黑胶虫样本鉴定

      目前检测的黑胶虫样本,实际上62%为细菌,38%为支原体(如下图1)


      图1


      ? 病毒


      病毒感染可能来自宿主动物细胞或病人,病毒感染及传播具有细胞专一性,在细胞培养污染物中是相对最难检测的。然而一旦细胞遭受污染后显微镜下能明显观察到细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落等病态变形,严重时会在单层细胞上观察到局部破损空斑。


      解决方案:

      可选用辐照血清以避免带进任何活的微生物进入培养体系。


                


              图2.Before infection           图3.After 24 hours infectiond

      细胞株的交叉污染,曾有文献报道统计,目前使用的细胞株大约有15~20%不是科学家们所认为的细胞,而在生物医药领域中,细胞来源和细胞株身份鉴定检测观念普遍缺乏。细胞株的交叉污染,常在不经意的实验疏失疏忽(不同细胞株分盘时,共享一瓶培养基、枪头、移液管忘记更换,而造成

      不? 细胞交叉污染同


      目前常用的细胞身份验证的方式包括:短串联重复序列(STR)、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性(AFLP)的特征分析等方法。其中STR,是目前国际细胞库(包括:ATCC、DSMZ或是JCRB)常用于细胞株身份鉴定方法。

      小编温馨提示,至少每半年一次进行细胞鉴定,当然理想情况每2-3个月鉴定一次,且课题开展前最好先确认使用的细胞身份。


      解决方案:


      Dr.Cell可提供:

      1. 人源细胞系STR鉴定(STR Authentication)

      2. 细胞物种鉴定(Species Identification)-15种常见模式动物的鉴定


      原文链接:


      THE END


      您在实验中有过这些问题嘛?

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      欢迎大家留言吐槽噢~


      好啦,本期介绍就到这里啦,后续小编会根据顺序


      继续为大家分享噢~


       Reference 

      1. ”Nanobacteria are Mineralo Fetuin(胎球蛋白) Complexes” -Didier Raoult, patricia Renesto et al. PLoSPathogens. 2008 Feb.,4(2):e41

      2. ”Menbrane Vesicles NucleateMineralo-organic Nanoparticles and induce Carbonate Apatite Precipitation inHuman Body Fluids” -Cheng-Yeu Wu, John D. Young et al. The Journal of BiolocalChemistry. 2013 Oct., 288(42): 30571-30584



      产品咨询:021-58785545-8006, 18917190011

      技术支持:400-820-3979





      血清沉淀知多少?
      细胞养不好,考虑过支原体污染吗?

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      2019年08月08日

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